Huis > Nieuws > bedrijfsnieuws

Analyse van veel voorkomende problemen bij prokaryote eiwitexpressie

Update tijd : 2021-03-04

Bron:

Keer bekeken : 18

Analyse van veel voorkomende problemen bij prokaryote eiwitexpressie

Prokaryote expressie verwijst naar de methode voor het construeren van een expressievector en het introduceren van een vreemd doelgen in een expressiestam door middel van genkloontechnologie, zodat het tot expressie kan worden gebracht in een specifiek prokaryotisch organisme of cel. Het prokaryotische eiwitexpressiesysteem is momenteel de meest gebruikte en meest economische eiwitexpressiemethode. Het expressiesysteem van Escherichia coli is een van de meest gebruikte prokaryotische eiwitexpressiesystemen.

Escherichia coli expression system Features

Een compleet expressiesysteem omvat gewoonlijk ondersteunende expressievectoren en expressiestammen. Als het een speciale geïnduceerde expressie is, omvat het ook een inductor en omvat fusie-expressie ook een zuiveringssysteem of Tag-detectie. De keuze van een expressiesysteem hangt meestal af van het doel van het experiment, zoals het expressieniveau, de activiteit van het doeleiwit, de zuiveringsmethode van het expressieproduct, enzovoort. Het volgende introduceert de algemene problemen bij het prokaryotische expressieproces.

 

V: Waarom verschijnt het doeleiwit altijd in de vorm van inclusielichaampjes?

A: Bij prokaryote expressie en zuivering vouwt het doeleiwit vaak verkeerd en aggregeert het in inclusielichamen. Na inductie kan de expressie van het doeleiwit gewoonlijk meer dan 50% van het totale celeiwit bereiken.

Hoewel een bepaald deel van het eiwit in oplosbare vorm voorkomt, is maar liefst 95% van het eiwit aanwezig in de inclusielichamen. Om meer oplosbaar eiwit te verkrijgen, kan tijdens het experiment de inductietemperatuur worden verlaagd, bijvoorbeeld 16-30 ° C, of kan de IPTG-concentratie (0,01-0,1 mM) worden verlaagd en kan de inductietijd worden verlengd. Een speciaal medium kan ook worden gebruikt om bacteriën te kweken.



V: Waarom is het moeilijk om transmembraaneiwitten tot expressie te brengen?

A: Het relatief lage succespercentage van expressie van transmembraaneiwitten is een veelvoorkomend probleem. Er kunnen twee hoofdredenen zijn:

 

1. Transmembraaneiwitten zijn over het algemeen gemaakt van sterke hydrofobe aminozuurmoleculen en hydrofiele moleculen die op een hoppende manier met elkaar zijn verbonden om de eenvoudigste hydrofiele en hydrofobe chemische transmembraanstructuur te vormen, die vergelijkbaar is met de structuur van signaalpeptiden.

Voor prokaryote cellen kunnen eenvoudige organellen het complexe proces van signaalpeptideherkenning en excisie nauwelijks voltooien, waardoor het endoplasmatisch reticulum en het Golgi-apparaat worden geleid om opnieuw in te pakken en uit te scheiden zoals eukaryote cellen. Sommige eiwitten passeren het membraan meerdere keren. Voor prokaryote cellen Het is bijna onmogelijk voor de cel om de taak uit te voeren.


2. Voor hydrofobe fragmenten worden inclusielichaampjes gemakkelijk gevormd bij prokaryote celexpressie. Hydrofobe peptiden kunnen het translatieproces remmen en zelfs versmelten met de prokaryote membraanstructuur om toxiciteit te vormen. In het instinct van biologische zelfbescherming zullen alle organellen het proces van eiwitsynthese stoppen.

 

Als u geïnteresseerd bent in dit onderwerp, ga dan verder met het bijgewerkte artikel van Generalbiosystems over de analyse van veelvoorkomende problemen bij prokaryote eiwitexpressie.